癌幹細胞マーカーＣＤ４４が活性酸素を抑制することによって
腫瘍の増大や治療が効かない状況を引き起こす分子メカニズムを解明

癌組織の中に存在し、その構成細胞を作る大本となる細胞を癌幹細胞と呼びます。抗癌剤・放射線治療に対する抵抗性や癌の再発・転移に癌幹細胞が深く関わることが広く知られるようになり、癌の根治を目指すためには、癌幹細胞を標的にした治療法の確立が重要な目標と考えられています。これまで、癌幹細胞を分離するためのマーカーの探索やそのマーカーで分離した細胞の特性解析が盛んに行われている一方で、それらマーカーが単に癌幹細胞を分別するための標識に過ぎないのか、それともそれ自身が機能的な役割を持つのかについては、ほぼ未解明のままでした。

今回の発表は、癌幹細胞の主要な表面マーカーの１つであるＣＤ４４を介した酸化ストレス^注１）回避機構が、腫瘍の増大や治療抵抗性に関与することを明らかにしたものです。これらの知見は癌幹細胞を標的にした治療法の確立につながる大きな可能性を秘めていると考えられます。

１．研究の背景と目的

近年、癌組織中には自己複製機能を持ち、異なる分化段階の細胞を生産する能力を有する癌幹細胞の存在が知られており、癌における抗癌剤・放射線治療に対する抵抗性や癌の再発には、この癌幹細胞の存在が関与していると考えられています。そのため、癌幹細胞を認識する特異的なマーカーやその機能については、世界中で活発な研究が行われてきました。なかでもＣＤ４４陽性の癌細胞は、乳癌、膵臓癌、胃癌、大腸癌などの固形癌において、免疫不全マウスへの腫瘍形成能力が高く、癌幹細胞としての特性を持つことが報告されてきました。また、これまでに、癌幹細胞としての性質を維持するためには細胞内のＲＯＳが低く保たれていることが、重要であることが知られていました。そこで、永野助教らは、ＣＤ４４が酸化ストレスへの抵抗性に関わるのではないかと考え、その分子メカニズムの解明に向けて本研究に取り組みました。

２．主要な研究成果ならびにその意義

まず、ＣＤ４４高発現および低発現の消化器癌細胞株を用いてＣＤ４４の発現状態とＲＯＳの関連性を調べました。ＲＯＳの量を検出できる蛍光プローブを用いて細胞内のＲＯＳを定量化した結果、ＣＤ４４高発現株においては細胞内ＲＯＳの蓄積が生じにくく、反対にＣＤ４４低発現株ではＲＯＳの蓄積が生じやすいことが分かりました。次に、このＲＯＳ量の調節がＣＤ４４によるものかを検証するために、ＣＤ４４高発現癌細胞においてＣＤ４４の発現をＲＮＡ干渉法（ＲＮＡｉ）^注２）を用いて抑制してみると、細胞内ＲＯＳの蓄積が誘導できるようになることから、ＣＤ４４がＲＯＳの蓄積を抑える何らかの機能を有していることが分かりました。そこで次に、その分子機構を解析した結果、非酵素性の抗酸化物質であるグルタチオンの細胞内含有量がＣＤ４４発現抑制により著明に低下し、細胞内ＲＯＳの蓄積を誘導することが分かりました。

さらに解析を進めた結果、ＣＤ４４はグルタチオン合成の材料となる細胞外シスチン（アミノ酸の１つ）の取り込みに関わるトランスポーターｘＣＴ^注３）を細胞膜上で安定化させることで、その抑制機能を高めることが分かりました。

細胞内ＲＯＳの蓄積は、酸化ストレスシグナルであるｐ３８ＭＡＰＫやｐ２１の活性化を誘導し、癌の増殖および進展を抑制することが知られています。自然発症型胃癌マウスモデルを解析したところＣＤ４４が発現している癌細胞ではこれらの酸化ストレスシグナルの活性化が抑えられていることが分かりました（図１）。

そこで、次に、金沢大学がん研究所において開発された胃癌発症モデルマウスとＣＤ４４ノックアウトマウスを交配し、ＣＤ４４ノックアウト胃癌マウスを作製して、生体レベルでのＣＤ４４の機能解析を行いました。その結果、ＣＤ４４発現の抑制は腫瘍の増大に対して明らかな抑制効果を持つこと、またその際に酸化ストレスシグナルｐ３８ＭＡＰＫ活性化およびｐ２１の発現上昇が誘導されることが示されました（図２）。

これらの結果から、ＣＤ４４を介した細胞内ＲＯＳ抑制機構は、腫瘍の増大や治療に対する抵抗性に寄与していることが分かりました。つまりＣＤ４４の発現が高い癌においてはＣＤ４４やｘＣＴを標的とした治療を行うことで、癌幹細胞を特異的に標的とした治療法を開発できる可能性を示しています（図３）。

３．今後の展開

既にｘＣＴに対し特異的に阻害作用を示すことが知られている既存薬剤を用いた動物実験により、有意な腫瘍抑制効果および抗癌剤感受性増強効果が得られています。このことから、今後その薬剤を用いた臨床研究を臨床の先生方および企業と連携し行っていきたいと考えています。

４.　特記すべき事項

今回の研究成果は、我が国の５つの研究グループが、およそ６年の歳月をかけて互いの専門的知識と技能と資材を結集することによって完成したものであり、共同研究の相乗効果なしには到底為し得なかったと考えます。近年、領域を超えた多数のチームが、互いの力を融合させることによって成果を上げることが望まれていますが、その良い実例を示すことができたと思っています。

本研究の一部は、ＪＳＴ 戦略的創造研究推進事業 チーム型研究（ＣＲＥＳＴ）の研究課題「人工癌幹細胞を用いた分化制御異常解析と癌創薬研究」（研究代表者：佐谷 秀行）、同事業 ＥＲＡＴＯ型研究「末松ガスバイオロジープロジェクト」（研究総括：末松 誠）の一環として行われました。また、現在、ＪＳＴ 研究成果最適展開支援事業（Ａ－ＳＴＥＰ）の課題として、癌治療用抗体医薬の実用化に向けた開発を進めています。

＜参考図＞

＜用語解説＞

注１） 酸化ストレス

活性酸素の生成による酸化反応と、生体内の抗酸化システムによる抗酸化反応のバランスが崩れ、活性酸素が過剰となり生体にとって好ましくない状態のこと。

注２） ＲＮＡ干渉法（ＲＮＡｉ）

標的とするタンパク質のｍＲＮＡ発現を特異的に抑制する方法。

注３） ｘＣＴ

アミノ酸の１つであるシスチンを細胞内に取り込むために必要なトランスポーターを構成するタンパク質。

注４） ＣＤ４４バリアントアイソフォーム（ＣＤ４４ｖ）

接着分子ＣＤ４４では、ｍＲＮＡが分断され、いくつかの部分が除去されて新しいｍＲＮＡができることにより、多種類の産物ができることが知られている。ＣＤ４４ｖはそのうち癌組織で高発現するもの。

＜お問い合わせ先＞

＜研究に関すること＞

永野 修（ナガノ オサム）、佐谷 秀行（サヤ ヒデユキ）
慶應義塾大学 先端医科学研究所　遺伝子制御研究部門
〒160-8582 東京都新宿区信濃町３５
Tel：03-5363-3982　Fax：03-5363-3982
E-mail：
ホームページ　http://genereg.jp/index.html

＜報道担当＞

吉野（ヨシノ）
慶應義塾大学 医学部　庶務課
〒160-8582 東京都新宿区信濃町３５
Tel：03-5363-3611　Fax：03-5363-3612
E-mail：

科学技術振興機構　広報ポータル部
〒102-8666 東京都千代田区四番町５番地３
Tel：03-5214-8404　Fax：03-5214-8432
E-mail：